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ELISA試劑盒抗體反應使抗原固相化

 更新時間:2020-11-04 點擊量:932
  ELISA試劑盒因此含雜質(zhì)較多的抗原也可選用捕獲包被法,試驗的特異性、敏感性均由此得以改善,重復性亦佳。蛋白質(zhì)與聚苯乙烯固相載體是通過物理吸附聯(lián)絡的,靠的是蛋白質(zhì)分子結(jié)構上的疏水基團與固相載體表面的疏水基團間的效果于??蓪⒕郾揭蚁┌逑冉?jīng)紫外線照射(例如30W紫外燈,75cm照射12小時),以增加其吸附功能。例如,在檢查抗DNA抗體時,需用DNA作為包被抗原,ELISA試劑盒而廣泛的固相載體一般不能直接與核酸聯(lián)絡。換言之,包被就是抗原或抗體聯(lián)絡到固相載體表面的進程。當抗原決定簇存在于或鄰近于疏水區(qū)域時,抗原與固相載體的直接吸附可使抗原決定簇不能充分露出,在這種情況下,直接包被效果不佳,可以選用直接的捕獲包被法,即先將關于該抗原的特異抗體作預包被,這今后通過抗原。也可用親和素生物素體系作直接包被,即用親和素先包被載體,然后參與生物素化的DNA,這種包被方法均勻、結(jié)實,已擴展應用于各種抗原物質(zhì)的定量測定。
 
  ELISA試劑盒的基本原理有三條:
 
  (1)抗原或抗體能以物理性地吸附于固相載體表面,可能是蛋白和聚苯乙烯表面間的疏水性部分彼此吸附,并堅持其免疫學活性;
 
  (2)抗原或抗體可通過共價鍵與酶聯(lián)接形成酶聯(lián)絡物,試劑盒而此種酶聯(lián)絡物仍能堅持其免疫學和酶學活性;
 
  (3)試劑盒酶聯(lián)絡物與相應抗原或抗體聯(lián)絡后,可依據(jù)參與底物的顏色反應來判定是不是有免疫反應的存在,而且顏色反應的深淺是與標本中相應抗原或抗體的量成正比例的,因此,可以按底物顯色的程度顯現(xiàn)試驗效果。法是免疫診斷中的一項新技術,現(xiàn)已成功地應用于多種病原微生物所導致的盛行癥、寄生蟲病及非盛行癥等方面的免疫診斷。也已應用于大分子抗原和小分子抗原的定量測定,試劑盒依據(jù)現(xiàn)已運用的效果,認為法具有活絡、特異、簡略、快速、安穩(wěn)及易于自動化操作等特征。不只適用于臨床標本的檢查,而且因為一天以內(nèi)可以檢查幾百甚至上千份標本,因此,也適合于血清盛行病學調(diào)查。
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